Alat السريع Antigen: المعرفة الأساسية لكشف الحمض النووي - الجزء 1

أزال سريع المستضد: المعرفة الأساسية للكشف عن الحمض النووي

1. ما هو اكتشاف الحمض النووي

تعريف الحمض النووي: الحمض النووي هو نوع من الصناديق البيولوجية التي تتصل بها النيوكليوتيدات أو deoxynucleotides من خلال السندات 3 '، 5' - فوسفات ديوستر.

يحتوي الحمض النووي على وظائف بيولوجية مهمة للغاية وتخزين المعلومات الوراثية وتخزينها بشكل رئيسي.

2. تصنيف الأحماض النووية

يمكن تقسيم Macromolecules الحمض النووي إلى فئتين: حمض Deoxyribonucleic (الحمض النووي) وحمض ريبونوكليك (الحمض النووي الريبي).

3. تكوين الحمض النووي

يتم تشكيل الحمض النووي والحمض النووي الريبي من خلال توصيل رأس وذيل النيوكليوتيد، وهو يتألف من خمسة عناصر: C، H، O، N و P.dna هي المادة الوراثية لمعظم الكائنات الحية. الحمض النووي الريبي مادة جينية من فيروسات وراثية من الفيروسات الحرة الحمض النووي، مثل فيروس نقص المناعة البشرية والأنفلونزا والسارس، وما إلى ذلك. متوسط ​​طول الحمض النووي الريبي حوالي 2000 نوكليوتيدات، في حين أن الحمض النووي البشري طويل جدا، حوالي 3x10 ^ 9 النيوكليوتيدات.

4. وظيفة الحمض النووي

يلعب دورا في تخزين ونقل المعلومات الوراثية في النسخ المتماثل البروتيني والتوليف. الحمض النوويزي ليس فقط المواد الوراثية الأساسية، ولكن أيضا يلعب دورا مهما في البروتين الحيوي. لذلك، يلعب دورا حاسما في سلسلة من ظواهر الحياة المهمة مثل النمو والوراثة والاختلاف.

الحمض النووي الحمض النووي الريبي الأحماض النووية. ما هي الاختلافات في تكوينها الكيميائي كما يلي:

5. طريقة الاختبار

تكتشف طريقة اكتشاف الحمض النووي بشكل رئيسي الحمض النووي المستهدف في العينة من خلال تضخيم الحمض الناوي المستهدف وتوليد الإشارة القابلة للكشف. يمكن تطبيقها على اكتشاف الحمض النووي في علم الأحياء الدقيقة السريرية وفحص الدم وتشخيص الأمراض الوراثية والوقاية من الطب الشرعي مجالات أخرى.

في الوقت الحاضر، الأساليب الرئيسية المستخدمة هي كما يلي:

أ. تضخيم تسلسل الحمض النووي

NASBA هي تقنية جديدة لتضخيم RNA متساوي الحرارة بوساطة من قبل زوج من الاشعال، وهي تسلسل نوكليوتيد موحد وغير موحدة ومحددة في المختبر. تم تنفيذه التفاعل عند 42 درجة مئوية، ويمكن تضخيم قالب الحمض النووي الريبي حوالي 109 مرة في 2 ساعات العمل. مبدأ NASBA هو استخراج الحمض النووي الريبي الفيروسي، أضف AMV Transcragase عكس AMV، Rnase H، T7RNA Polymerase والمواصفات للتضخيم. يتم تقسيم رد الفعل كله إلى مرحلة غير دورية ومرحلة دورية: في المرحلة غير الدورية، التمهيدي الأول والقالب يتم صلب الحمض النووي الريبي لتوليف CDNA بموجب عمل AMV Transcragase العكسي لتشكيل RNA: DNA Hybrid، ثم RNASEH DETRADS RNA، يتم صلب RNASE II و CDNA لتصنيع حبلا مكمل ثاني الحمض النووي تحت إجراءات Transcressase العكسية. Under of T7RNA Polymerase، يمكن أن تبدأ الحمض النووي المزدوج الذي تقطعت بهم السبل بواسطة تسلسل مروجه لنسبط الحمض النووي الريبي. يمكن أن تكون الحمض النووي الريبي عكس نقلها في الحمض النووي تحت إجراءات النسون العكسي، وأدخل المرحلة المتداولة وتضخيم عدد كبير من القوالب.

ب. النسخ بوساطة التضخيم

المبدأ الفني من TMA هو في الأساس نفس ناسبا. الفرق الطفيف هو أن TMA يستخدم MMLV عكس الترتيب والبولاميراز T7RNA. يحتوي MMLV Translessase العكسي على كل من نشاط Transcragase العكسي ونشاط Rnase H. تم إجراء التفاعل عند 41.5 ℃، ويمكن تضخم قالب الحمض النووي الريبي حوالي 109 مرة في ساعة واحدة.

ج. رد فعل سلسلة محفز Ligase (LCR)

LCR هي تقنية تضخيم التحقيق بناء على التحويل الرابط البيني للجزيئات المستهدفة. إنها واعدة في تكنولوجيا تضخيم المختبر المتقدمة بعد مبدأ PCR.its هو التبديل من الجزءين من الشريطين Oligonucleotide واحد مسبار الحمض النووي الذي تقطعت بهم السبل مع التسلسل المستهدف. عندما يتلاشى القطاع الحمض النواني مع القالب دون طفرة، إذا كانت التحقيقتان مجاوران ولا يوجد فاصل من النيوكليوتيد في المنتصف، فيمكن توصيله بموجب عمل Ligase، ويمكن استخدام السلسلة الجديدة بعد الاتصال ك قالب لتوجيه الاتصال في الدورة التالية لإنتاج سلاسل فرعية جديدة. إذا حدث طفرة النيوكليوتيد في قسم الاتصال، لا يمكن أن يحدث رد فعل الاتصال وسيتم إنهاء رد فعل تضخيم.

د. اختبار تفاعل سلسلة Polymerase (PCR)

المبدأ الأساسي لتكنولوجيا PCR يشبه عملية النسخ المتماثل الطبيعي للحمض النووي، ويعتمد خصوصيته على الاشعال الذاتي Oligonucleotide مكملين لكلا طرفي التسلسل المستهدف. يتكون PPCR من ثلاثة خطوات رد فعل أساسية: إلحاق إلحاح الديوان.

① تدوين قالب الحمض النووي: بعد أن يتم تسخين الحمض النووي القالب إلى حوالي 93 ℃ لوقت معين، يتم فصل حبلا مزدوجا من الحمض النووي القالب أو الحمض النووي المزدوج عن طريق تضخيم PCR لتشكيل حبلا مفرد، بحيث يمكن دمجها مع الاشعاليات للتحضير للجولة التالية من رد الفعل.

② الصلبة (إعادة تشديد) من الحمض النووي القالب والتمهيدي: بعد أن يتم تسخين الحمض النووي القالب ودواها في حبلا واحدة، تنخفض درجة الحرارة إلى حوالي 55 ℃، ويتم إقران التمهيدي بالتسلسل التكميلي للنشر الوحيد من قالب الحمض النووي.

③ تمديد التمهيدي: بموجب عمل Polymerase Taqdna، يستخدم Build Temper DNA Primer DNTP كمواد خام ردة التفاعل والتسلسل المستهدف كقالب لتوليف سلسلة النسخ المتماثل شبه المحتجيب الجديد تكميلية لسلسلة DNA القالب وفقا لمبدأ الاقتران الأساسي وشبه الاحتفاظ به تكرار. كرر العمليات الثلاثة للضرب الدوري إلحاح امتداد إلحاحها للحصول على المزيد من سلاسل النسخ المتماثل \"شبه الاحتفاظ بالنسخ المتماثل \"، ويمكن أن تصبح هذه السلسلة الجديدة القالب للقيام بالدورة التالية. يستغرق 2-4 دقائق و 2-3 ساعات لتضخيم الجين المستهدف لتوسيع الملايين من المرات. للكشف عن فيروس نقص المناعة البشرية الحمض النووي الريبي، نحتاج إلى نقل الحمض النووي الريبي إلى CDNA عن طريق تفاعل النسخ العكسي، ثم تضخيم PCR مع CDNA كقالب. يسمى هذا التفاعل RT-PCR.